Bacillus subtilis/ja: Difference between revisions

Bacillus subtilis/ja
Created page with "レシピエントとなる細菌が、同種の別の細菌から外来DNAを取り込み、染色体に組み換えるためには、コンピテンスと呼ばれる特別な生理的状態にならなければならない。 枯草菌''のコンピテンスは、対数増殖の終わり頃、特にアミノ酸が制限された条件下で誘導される。このようなストレスの多い半絶食条件下では、細胞は通常染色..."
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枯草菌''のコンピテンスは、対数増殖の終わり頃、特にアミノ酸が制限された条件下で誘導される。このようなストレスの多い半絶食条件下では、細胞は通常染色体を1コピーしか持たず、DNA損傷が増加する可能性が高い。形質転換がDNA損傷を修復する''枯草菌''の適応機能であるかどうかを調べるため、紫外線を損傷剤として用いた実験が行われた。これらの実験から、DNAの取り込みを伴うコンピテンスはDNA損傷条件によって特異的に誘導され、形質転換はDNA損傷の組換え修復プロセスとして機能するという結論に達した。
枯草菌''のコンピテンスは、対数増殖の終わり頃、特にアミノ酸が制限された条件下で誘導される。このようなストレスの多い半絶食条件下では、細胞は通常染色体を1コピーしか持たず、DNA損傷が増加する可能性が高い。形質転換がDNA損傷を修復する''枯草菌''の適応機能であるかどうかを調べるため、紫外線を損傷剤として用いた実験が行われた。これらの実験から、DNAの取り込みを伴うコンピテンスはDNA損傷条件によって特異的に誘導され、形質転換はDNA損傷の組換え修復プロセスとして機能するという結論に達した。


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天然のコンピテントな状態は実験室の''枯草菌''や野外分離株では一般的であるが、工業的に重要な菌株、例えば''枯草菌''(納豆菌)の中には、外来DNAを分解する制限修飾系の存在により、DNAの取り込みに消極的なものがある。I型制限修飾系エンドヌクレアーゼに欠損を持つ''枯草菌''(納豆菌)変異体は、交配実験において共役プラスミドのレシピエントとして働くことができ、この特定の''枯草菌''株のさらなる遺伝子工学への道を開いた。
While the natural competent state is common within laboratory ''B. subtilis'' and field isolates, some industrially relevant strains, e.g. ''B. subtilis'' (natto), are reluctant to DNA uptake due to the presence of restriction modification systems that degrade exogenous DNA. ''B. subtilis'' (natto) mutants, which are defective in a type I restriction modification system endonuclease, are able to act as recipients of conjugative plasmids in mating experiments, paving the way for further genetic engineering of this particular ''B. subtilis'' strain.
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<div lang="en" dir="ltr" class="mw-content-ltr">
グリーンケミストリーを採用することで、危険性の少ない材料を使用し、コストを節約しながら、研究者たちは、食品や医薬品産業に有用な化学物質を合成する自然の方法を模倣してきた。 それぞれのDNA鎖は、対応する2本のDNA鎖がジッパーのように結合するときに、同時に特定の化学反応を起こす特定の分子を運び、DNAの相補的な結合に運び込まれた分子同士が、制御された孤立した反応を起こすようにする。 この方法を、多段階の複製過程を自然にたどるある種のバクテリアに用いることで、研究者たちは、バクテリア自身がDNAの複製過程を行うのと同様に、カプセルのように扱うことで、これらの付加された分子が酵素や二次反応に使われる他の分子と相互作用するのを同時に進めることができる。
By adopting Green Chemistry in the use of less hazardous materials, while saving cost, researchers have been mimicking nature's methods of synthesizing chemicals that can be useful for the food and drug industry, by "piggybacking molecules on shorts strands of DNA" before they are zipped together during their complementary base pairing between the two strands.  Each strand will carry a particular molecule of interest that will undergo a specific chemical reaction simultaneously when the two corresponding strands of DNA pairs hold together like a zipper, allowing another molecule of interest, to react with one another in controlled and isolated reaction between those molecules being carried into these DNA complementary attachments.  By using this method with certain bacterias that naturally  follow a process replication in a multi-step fashion, the researchers can simultaneously carry on the interactions of these added molecules to interact with enzymes and other molecules used for a secondary reaction by treating it like a capsule, which is similar to how the bacteria performs its own DNA replication processes.
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<div lang="en" dir="ltr" class="mw-content-ltr">
<span id="Uses"></span>
==Uses==
== 用途 ==
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{{Anchor|Uses}}


<div lang="en" dir="ltr" class="mw-content-ltr">
===20世紀===
===20th century===
[[Image:Bacillus subtilis Gram.jpg|thumb|right|グラム染色された''枯草菌'']]
[[Image:Bacillus subtilis Gram.jpg|thumb|right|Gram-stained ''B. subtilis'']]
''枯草菌''の培養液は、[[antibiotics/ja|抗生物質]]が登場する以前には、[[gastrointestinal/ja|消化管]][[urinary tract/ja|尿路]]疾患の治療を助ける免疫賦活剤として世界的に普及していた。1950年代を通じて代替医療として使用されており、消化されると[[Broad-spectrum therapeutic/ja|広範囲の免疫活性]]を顕著に刺激し、特定の[[antibodies/ja|抗体]][[IgM/ja|IgM]][[Immunoglobulin G/ja|IgG]][[IgA/ja|IgA]])の分泌の活性化や[[CpG dinucleotide/ja|CpGジヌクレオチド]]の放出による[[leukocytes/ja|白血球]][[interferon/ja|インターフェロン]] [[IFN-α/ja|IFN-α]]/[[IFNγ/ja|IFNγ]]産生活性、[[cytokines/ja|サイトカイン]]の放出を含む免疫活性を引き起こし、[[tumor cells/ja|腫瘍細胞]]への[[cytotoxicity/ja|細胞毒性]]の発達に重要な働きをする。1946年からアメリカとヨーロッパで免疫刺激補助剤として販売され、[[Rotavirus/ja|ロタウイルス]][[Shigellosis/ja|赤痢]]などの腸管および尿路疾患の治療に使用されました。1966年、米軍はニューヨーク市の地下鉄駅の格子に5日間''bacillus subtilis''を撒き、不思議な塵に覆われた際の人々の反応を観察した。その生存能力から、今もそこに存在していると考えられている。
Cultures of ''B.&nbsp;subtilis'' were popular worldwide, before the introduction of [[antibiotics]], as an immunostimulatory agent to aid treatment of [[gastrointestinal]] and [[urinary tract]] diseases. It was used throughout the 1950s as an [[alternative medicine]], which upon digestion has been found to significantly stimulate [[Broad-spectrum therapeutic|broad-spectrum immune activity]] including activation of secretion of specific [[antibodies]] [[IgM]], [[Immunoglobulin G|IgG]] and [[IgA]] and release of [[CpG dinucleotide]]s inducing [[interferon]] [[IFN-α]]/[[IFNγ]] producing activity of [[leukocytes]] and [[cytokines]] important in the development of [[cytotoxicity]] towards [[tumor cells]]. It was marketed throughout America and Europe from 1946 as an immunostimulatory aid in the treatment of gut and urinary tract diseases such as [[Rotavirus]] and [[Shigellosis]]. In 1966, the U.S. Army dumped ''bacillus subtilis'' onto the grates of New York City subway stations for five days in order to observe people's reactions when coated by a strange dust. Due to its ability to survive, it is thought to still be present there.
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抗生物質[[bacitracin/ja|バシトラシン]]は、1945年に「トレイシーI」と名付けられた''[[Bacillus licheniformis/ja|バチルス・リシェニフォルミス]]''の一種から初めて単離された。現在でも、液体[[growth medium/ja|増殖培地]]の容器でこの品種を増殖させることにより、商業的に製造されている。時間の経過とともに、細菌はバシトラシンを合成し、培地中に抗生物質を分泌する。バシトラシンはその後、化学的処理によって培地から抽出される。
The antibiotic [[bacitracin]] was first isolated from a variety of ''[[Bacillus licheniformis]]'' named "Tracy I" in 1945, then considered part of the ''B. subtilis'' species. It is still commercially manufactured by growing the variety in a container of liquid [[growth medium]]. Over time, the bacteria synthesizes bacitracin and secretes the antibiotic into the medium. The bacitracin is then extracted from the medium using chemical processes.
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1960年代以降、''枯草菌''は宇宙飛行実験の実験種として使われてきた歴史がある。その[[内胞子]]は、太陽紫外線から保護するダスト粒子によってコーティングされていれば、宇宙空間で6年間生存することができる。これは[[:en:Exobiology Radiation Assembly|宇宙生物学放射線アセンブリ]][[:en:EXOSTACK|EXOSTACK]][[:en:EXPOSE|EXPOSE]]などの[[:en:outer space|宇宙空間]]での[[:en:extremophile|極限環境]]生存指標として使用されてきた。
Since the 1960s ''B. subtilis'' has had a history as a test species in spaceflight experimentation. Its [[endospore]]s can survive up to 6 years in space if coated by dust particles protecting it from solar UV rays. It has been used as an [[extremophile]] survival indicator in [[outer space]] such as [[Exobiology Radiation Assembly]], [[EXOSTACK]], and [[EXPOSE]] orbital missions.
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枯草菌の野生型天然分離株は、[[mutagenesis/ja|突然変異誘発]]と淘汰の家畜化過程を経た実験室株と比較して、作業が困難である。これらの菌株は、しばしば形質転換(環境DNAの取り込みと統合)、増殖の能力が向上しており、「野生」で必要とされる能力を失っている。 そして、この説明に当てはまる菌株は何十種類も存在するが、「168」と指定された菌株が最も広く使われている。168株は''枯草菌''マールブルグ株のX線突然変異誘発の後に単離された[[tryptophan/ja|トリプトファン]][[auxotroph/ja|オーソトロフ]]菌であり、形質転換効率が高いため研究に広く用いられている。
Wild-type natural isolates of ''B. subtilis'' are difficult to work with compared to laboratory strains that have undergone domestication processes of [[mutagenesis]] and selection. These strains often have improved capabilities of transformation (uptake and integration of environmental DNA), growth, and loss of abilities needed "in the wild".  And, while dozens of different strains fitting this description exist, the strain designated '168' is the most widely used. Strain 168 is a [[tryptophan]] [[auxotroph]] isolated after X-ray mutagenesis of ''B. subtilis'' Marburg strain and is widely used in research due to its high transformation efficiency.
[[Image:Bacillus subtilis colonies.jpg|thumb|right|200px|[[culture dish/ja|培養皿]]上で増殖した''枯草菌''のコロニー。[[molecular biology/ja|分子生物学]][[:en:laboratory|実験室]]で培養された''枯草菌''のコロニーである。]]
[[Image:Bacillus subtilis colonies.jpg|thumb|right|200px|Colonies of ''B. subtilis'' grown on a [[culture dish]] in a [[molecular biology]] [[laboratory]].]]
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バチルス・グロビギイ(''Bacillus globigii'')は、近縁種であるが現在では「[[Bacillus atrophaeus/ja|バチルス・アトロファエウス]]」として知られている[[phylogenetic/ja|系統学的]]に異なる種であり、[[Project SHAD/ja|プロジェクトSHAD]](別名''プロジェクト112'')において生物兵器[[Wiktionary:simulant|模擬物質]]として使用された。その後のゲノム解析により、これらの研究で使用された菌株は、異常な高率の[[sporulation/ja|胞子形成]]を示す菌株を意図的に濃縮した産物であることが判明した。
''Bacillus globigii'', a closely related but [[phylogenetic]]ally distinct species now known as ''[[Bacillus atrophaeus]]'' was used as a biowarfare [[Wiktionary:simulant|simulant]] during [[Project SHAD]] (aka ''Project 112''). Subsequent genomic analysis showed that the strains used in those studies were products of deliberate enrichment for strains that exhibited abnormally high rates of [[sporulation]].
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以前は「納豆菌」として知られていた''枯草菌''の菌株は、日本の食品''[[nattō/ja|納豆]]''や韓国の同様の食品''[[cheonggukjang/ja|チョングッジャン]]''の商業生産に使用されている。
A strain of ''B. subtilis'' formerly known as ''Bacillus natto'' is used in the commercial production of the Japanese food ''[[nattō]]'', as well as the similar Korean food ''[[cheonggukjang]]''.
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===21世紀===
===21st century===
*モデル生物として、''枯草菌''はグラム陽性胞子形成菌の基本的な性質や特性を発見することを目的とした実験室研究によく用いられる。 特に、''枯草菌''の胞子形成の研究から、耐久性のある内胞子の形成の基礎となる基本原理とメカニズムが推測されている。
*As a model organism, ''B. subtilis'' is commonly used in laboratory studies directed at discovering the fundamental properties and characteristics of Gram-positive spore-forming bacteria.  In particular, the basic principles and mechanisms underlying formation of the durable endospore have been deduced from studies of spore formation in ''B. subtilis''.
* その表面結合特性は、安全な放射性核種廃棄物(例:トリウム(IV)やプルトニウム(IV))処理に一役買っている。
* Its surface-binding properties play a role in safe radionuclide waste [e.g. thorium (IV) and plutonium (IV)] disposal.
* その優れた発酵特性により、高い生成物収率(1リットルあたり20~25グラム)を誇り、[[amylase/ja|アミラーゼ]]やプロテアーゼなどの様々な酵素の生産に使用される。
* Due to its excellent fermentation properties, with high product yields (20 to 25 gram per litre) it is used to produce various enzymes, such as [[amylase]] and proteases.
*枯草菌は[[horticulture/ja|園芸]][[agriculture/ja|農業]]において[[soil inoculant/ja|土壌接種剤]]として使用される。
*''B. subtilis'' is used as a [[soil inoculant]] in [[horticulture]] and [[agriculture]].
* [[saffron/ja|サフラン]]栽培者にとって、球茎の成長を早め、茎葉のバイオマス収量を増加させることで、何らかの利益をもたらす可能性がある。
* It may provide some benefit to [[saffron]] growers by speeding corm growth and increasing stigma biomass yield.
* ガス滅菌の際に、滅菌サイクルが正常に完了したことを確認するための「指標生物」として使用される。特に''枯草菌''の胞子は、サイクルが胞子破壊条件に達したことを確認するために使用される。
* It is used as an "indicator organism" during gas sterilization procedures, to ensure a sterilization cycle has completed successfully. Specifically ''B. subtilis'' endospores are used to verify that a cycle has reached spore-destroying conditions.
* B.subtilis''は、受粉や果実の品質に支障をきたすことなく、マミーベリー菌こと''[[Monilinia/ja|Monilinia]]vaccinii-corymbosi''の増殖を防ぐ有用なバイオプロダクト殺菌剤として作用することが判明している。
* ''B. subtilis'' has been found to act as a useful bioproduct fungicide that prevents the growth of ''[[Monilinia]] vaccinii-corymbosi'', a.k.a. the mummy berry fungus, without interfering with pollination or fruit qualities.
*代謝的に活性な''枯草菌''細胞も非代謝的に活性な''枯草菌''細胞も、酸素が存在すると金(III)を金(I)と金(0)に還元することが示されている。この生物学的還元は、地質系における金の循環に関与しており、地質系から固体の金を回収するために利用できる可能性がある。
*Both metabolically active and non-metabolically active ''B. subtilis'' cells have been shown to reduce gold (III) to gold (I) and gold (0) when oxygen is present. This biotic reduction plays a role in gold cycling in geological systems and could potentially be used to recover solid gold from said systems.
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===新規株と人工株===
===Novel and artificial substrains===
* トリプトファン(Trp)ではなく、4-フルオロトリプトファン(4FTrp)を増殖に利用できる''枯草菌''の新規株が単離された。Trpオペロン[[Trp/ja|Trp]]は単一コドンによってのみコードされているため、遺伝暗号においてTrpが4FTrpに置き換わることができるという証拠がある。この実験により、正統的な遺伝暗号は変異可能であることが示された。
* Novel strains of ''B. subtilis'' that could use 4-fluorotryptophan (4FTrp) but not canonical tryptophan (Trp) for propagation were isolated. As [[Trp operon|Trp]] is only coded by a single codon, there is evidence that Trp can be displaced by 4FTrp in the genetic code. The experiments showed that the canonical genetic code can be mutable.
* 組換え株pBE2C1とpBE2C1ABは、[[polyhydroxyalkanoates/ja|ポリヒドロキシアルカノエート]](PHA)の生産に使用され、麦芽廃棄物は、より低コストのPHA生産のために、その炭素源として使用することができる。
* Recombinant strains pBE2C1 and pBE2C1AB were used in production of [[polyhydroxyalkanoates]] (PHA), and malt waste can be used as their carbon source for lower-cost PHA production.
* [[hyaluronic acid/ja|ヒアルロン酸]]の製造に使用され、ヘルスケアや化粧品の関節ケア分野で使用されている。
* It is used to produce [[hyaluronic acid]], which is used in the joint-care sector in healthcare and cosmetics.
* [[Monsanto]]社は、''枯草菌''からコールドスショック・プロテインBを発現する遺伝子を単離し、それを同社の干ばつ耐性トウモロコシ・ハイブリッドMON87460に組み込んだ。
*[[Monsanto]] has isolated a gene from ''B. subtilis'' that expresses cold shock protein B and spliced it into their drought-tolerant corn hybrid MON 87460, which was approved for sale in the US in November 2011.
*新菌株は、酵素を分泌して蜜を蜂蜜に変えるように改良された。
*A new strain has been modified to  convert nectar into [[honey]] by secreting enzymes.
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<div lang="en" dir="ltr" class="mw-content-ltr">
<span id="Safety"></span>
==Safety==
==安全性{{Anchor|Safety}}==
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===他の動物では===
===In other animals===
''枯草菌''は、米国FDA[[:en:Center for Veterinary Medicine|獣医学センター]]によって審査され、直接飼料化された微生物製品に使用しても安全性の懸念がないことが判明したため、[[:en:Association of American Feed Control Officials|米国飼料検査官協会]]は、36.14項「直接飼料化された微生物」の下で[[animal feed/ja|動物飼料]]成分としての使用が承認されたものとしてリストアップしている。
''Bacillus subtilis'' was reviewed by the US FDA [[Center for Veterinary Medicine]] and found to present no safety concerns when used in direct-fed microbial products, so the [[Association of American Feed Control Officials]] has listed it approved for use as an [[animal feed]] ingredient under Section 36.14 "Direct-fed Microorganisms".
[[:en:Canadian Food Inspection Agency|カナダ食品検査庁]]動物衛生・生産飼料部門は、''Bacillus''培養脱水承認飼料原料を[[silage/ja|サイレージ]]添加物としてSchedule IV-Part 2-Class 8.6に分類し、国際飼料成分番号IFN 8-19-119を付与している。
The [[Canadian Food Inspection Agency]] Animal Health and Production Feed Section has classified ''Bacillus'' culture dehydrated approved feed ingredients as a [[silage]] additive under Schedule IV-Part 2-Class 8.6 and assigned the International Feed Ingredient number IFN 8-19-119.
一方、''枯草菌''の生存胞子を含むいくつかの飼料添加物は、[[:en:European Food Safety Authority|欧州食品安全機関]]により、動物生産における体重増加のための安全な使用に関して肯定的な評価を受けている。
On the other hand, several feed additives containing viable spores of ''B. subtilis'' have been positively evaluated by the [[European Food Safety Authority]], regarding their safe use for weight gaining in animal production.
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<div lang="en" dir="ltr" class="mw-content-ltr">
===ヒトの場合===
===In humans===
''枯草菌''の芽胞は調理中に発生する極度の熱に耐えることができる。一部の''枯草菌''株は、腐敗したパン生地や焼き菓子において、長鎖[[polysaccharide/ja|多糖類]]の細菌産生によって引き起こされる粘着性、筋状の粘着性である、ロープ状腐敗を引き起こす原因となっている。長い間、パンのネバネバは生化学的検査によって''枯草菌''種と特異的に関連していた。 分子アッセイ(ランダム増幅多型DNA PCRアッセイ、[[denaturing gradient gel electrophoresis/ja|変性剤濃度勾配ゲル電気泳動]]分析、[[16S ribosomal DNA/ja|16SリボソームDNA]]のV3領域の塩基配列決定)により、パンの腐敗には''バチルス''種の多様性があることが明らかになった。
''Bacillus subtilis'' spores can survive the extreme heat generated during cooking. Some ''B. subtilis'' strains are responsible for causing ropiness or rope spoilage&nbsp;– a sticky, stringy consistency caused by bacterial production of long-chain [[polysaccharide]]s&nbsp;– in spoiled bread dough and baked goods. For a long time, bread ropiness was associated uniquely with ''B. subtilis'' species by biochemical tests.  Molecular assays (randomly amplified polymorphic DNA PCR assay, [[denaturing gradient gel electrophoresis]] analysis, and sequencing of the V3 region of [[16S ribosomal DNA]]) revealed greater ''Bacillus'' species variety in ropy breads, which all seems to have a positive amylase activity and high heat resistance.
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<div lang="en" dir="ltr" class="mw-content-ltr">
''枯草菌''CU1(1日あたり2×10<sup>9</sup>胞子)を健康な被験者を対象に16週間の試験(プロバイオティクスを10日間投与し、各月ごとに18日間の洗浄期間を設ける。健康な被験者には、同じ手順を4ヶ月間繰り返した)で評価した。その結果、''枯草菌'' CU1は副作用もなく、安全で忍容性が高いことが判明した。
''B. subtilis'' CU1 (2 × 10<sup>9</sup> spores per day) was evaluated in a 16-week study (10 days administration of probiotic, followed by 18 days wash-out period per each month; repeated same procedure for total 4 months) to healthy subjects. ''B. subtilis'' CU1 was found to be safe and well tolerated in the subjects without any side effects.
</div>


<div lang="en" dir="ltr" class="mw-content-ltr">
''枯草菌''およびそれに由来する物質は、食品への安全かつ有益な利用について、さまざまな権威ある機関によって評価されてきた。米国では、[[Food and Drug Administration/ja|食品医薬品局]](FDA)が1960年代初頭に発行した意見書により、''枯草菌''由来の[[carbohydrase/ja|カルボヒドラーゼ]]やプロテアーゼ酵素など、微生物由来のいくつかの物質が[[generally recognized as safe/ja|一般に安全と認められる]](GRAS)として指定された。この見解は、それぞれの生物の非病原性・非毒原性菌株の使用と、現行の適正製造規範の使用を前提としたものであった。FDAは、''枯草菌''株由来の酵素は1958年1月1日以前から食品に一般的に使用されており、''枯草菌''の非毒素原性・非病原性株は広く入手可能で、様々な食品用途に安全に使用されてきたと述べている。これには、日本で一般的に食べられている''[[Natto/ja|納豆]]'状の納豆の消費も含まれ、1グラムあたり10<sup>8</sup>もの生菌が含まれている。納豆は、健康的な腸内細菌叢と[[vitamin K2/ja|ビタミンK<sub>2</sub>]]の摂取に貢献することが認められている。このように広く使用されてきた長い歴史の中で、''納豆''''枯草菌''の存在に起因する可能性のある有害事象に関与していない。納豆とその主成分である''枯草菌''は、日本の[[:en:Ministry of Health, Labour, and Welfare|厚生労働省]]が健康保持に効果があるとして認可した特保(特定保健用食品)である。
''Bacillus subtilis'' and substances derived from it have been evaluated by different authoritative bodies for their safe and beneficial use in food. In the United States, an opinion letter issued in the early 1960s by the [[Food and Drug Administration]] (FDA) designated some substances derived from microorganisms as [[generally recognized as safe]] (GRAS), including [[carbohydrase]] and protease enzymes from ''B. subtilis''. The opinions were predicated on the use of nonpathogenic and nontoxicogenic strains of the respective organisms and on the use of current good manufacturing practices. The FDA stated that the enzymes derived from the ''B. subtilis'' strain were in common use in food prior to January 1, 1958, and that nontoxigenic and nonpathogenic strains of ''B. subtilis'' are widely available and have been safely used in a variety of food applications. This includes consumption of Japanese fermented soy bean, in the form of ''[[Natto]]'', which is commonly consumed in Japan, and contains as many as 10<sup>8</sup> viable cells per gram. The fermented beans are recognized for their contribution to a healthy gut flora and [[vitamin K2|vitamin K<sub>2</sub>]] intake; during this long history of widespread use, ''natto'' has not been implicated in adverse events potentially attributable to the presence of ''B. subtilis''. The natto product and the ''B. subtilis'' natto as its principal component are FOSHU (Foods for Specified Health Use) approved by the Japanese [[Ministry of Health, Labour, and Welfare]] as effective for preservation of health.
</div>


<div lang="en" dir="ltr" class="mw-content-ltr">
''枯草菌''[[:en:European Food Safety Authority|欧州食品安全機関]]から「適格な安全推定」のステータスを与えられている。
''Bacillus subtilis'' has been granted "Qualified Presumption of Safety" status by the [[European Food Safety Authority]].
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==こちらも参照==
==こちらも参照==