この検査はビタミンD欠乏症の診断に用いることができ、ビタミンD欠乏症のリスクが高い人に実施され、検査結果がビタミンDサプリメントによる補充療法開始の支持に用いられる。
骨粗鬆症、慢性腎臓病、吸収不良、肥満、その他の感染症の患者はビタミンD欠乏のリスクが高いため、この検査を受ける可能性が高い。ビタミンD欠乏症は、緯度の高い地域に住んでいる人や日光浴が制限されている人など、一部の集団ではよくみられるが、25(OH)D検査は通常、全住民に対して要求されることはない。医師は、リスクの低い患者には、スクリーニング検査を受ける代わりに市販のビタミンDサプリメントを摂取するように勧めることがある。