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バンティングとベストは、1921年秋にトロントに戻ったマクレオドにその結果を発表したが、マクレオドは実験デザインの欠陥を指摘し、より多くの犬とより良い設備で実験を繰り返すよう提案した。彼はバンティングとベストをより良い研究室に移し、バンティングに研究費から給料を払い始めた。数週間後、第2ラウンドの実験も成功し、マクラウドはその11月にトロントで非公開で結果を発表するのを手伝った。犬をダクトタイイングし、インスリンを抽出するのに数週間待つという時間のかかる作業にネックになっていたバンティングは、まだ消化腺が発達していない子牛の胎児膵臓からインスリンを抽出することを思いついた。12月までに、彼らは成牛の膵臓からインスリンを抽出することにも成功した。マクレオドはインスリンの精製に集中するため、研究室での他のすべての研究を中止した。彼は生化学者ジェームス・コリップを招いてこの作業を手伝わせ、チームは1ヶ月以内に臨床試験の準備ができたと感じた。

血液、尿、グラム単位の食事、グラム単位の食事処方を記録するために使用したエリザベス・ヒューズのカルテ

1922年1月11日、トロント総合病院で瀕死の状態にあった14歳の糖尿病患者レナード・トンプソンに、初めてインスリンの注射が行われた。しかし、その抽出液があまりにも不純だったため、トンプソンはひどいアレルギー反応を起こし、それ以降の注射は中止された。その後12日間、コリップは昼夜を問わず牛膵臓エキスの改良に努めた。2回目の注射は1月23日に行われ、明らかな副作用を引き起こすことなく、糖尿病の典型的な糖尿を解消した。アメリカ人最初の患者は、アメリカ国務長官チャールズ・エバンス・ヒューズの娘であるエリザベス・ヒューズであった。 ジョン・ラルストン・ウィリアムズは、トロントからニューヨーク州ロチェスターにインスリンを輸入し、ヘブンスを治療した。