葉酸欠乏症は、野菜などの葉酸を多く含む食品を十分に摂らない不健康な食生活、葉酸が消化器系でうまく吸収されない疾患（クローン病やセリアック病など）、葉酸の濃度に影響を及ぼすいくつかの遺伝的疾患、特定の医薬品（フェニトイン、スルファサラジン、トリメトプリム・スルファメトキサゾールなど）によって引き起こされることがある。葉酸欠乏症はアルコール摂取によって加速されるが、これはおそらく葉酸輸送の妨害によるものであろう。